目的

　生物系のラボでは日々、プラスミドの精製でミニプレップをしていると思います。来る日も来る日もひたすらミニプレップをしているせいで感覚が麻痺している（笑）と思いますが、結構コストがかかっています。。。

　以前の当ブログ記事では、格安ミニプレップキットについて紹介しました。 kanenashi-kenkyu.hatenablog.com

　上記の記事では、単純に使用するキットを変更してコストダウンをしようという話でした。今回は、これをもう一歩進めて、

スピンカラムだけ単品で購入し、
Bufferを自作してコストダウン

というところを記事に書こうと思います。

単品カラムはどこから買う？

　まずは、必要な単品カラムを調達します。様々なメーカーが単品カラムを販売していますが、ここは価格面で下記のもの一択でしょう（主観）。

メーカー	製品名	定価（税抜）	入数	単価
Favorgen	Plasmid DNA Extraction mini Column	8500円	100入	85円

（2018年5月現在）

　購入に当たっては、やはりキャンペーンを利用しましょう（笑）。下記のキャンペーンが、例年11月〜3月末まで行われています。これを利用することによって、300 prep分のカラムが17000円（からの値引き）で手に入れることが出来ます。 f:id:kanenashi_kenkyu:20180602121841j:plain

ミニプレップ用バッファーを自作しよう

　貧乏研究者なワタシにとって、自分で作れるモノは自分で作ってコストダウンが必須であります。インターネットの海原には素晴らしい先人たちの集合知が隠されており、ミニプレップ用バッファーレシピが数多く公開されています（笑）これらはいずれも簡単に作れます。

Buffer P1 (FAPD1)･･･50 mM Tris-HCl pH 8.0、10 mM EDTA、100 µg/ml RNase A；4℃保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
1 M Tris-HCl pH 8.0	2.5 ml	自作	レシピは記事中にあり	0.8円
0.5 M EDTA pH 8.0	1 ml	自作	レシピは記事中にあり	2.5円
ミリQ	46.5 ml	自前	ｰ	？
RNase A	5 mg	ナカライテスク	30141-14	525円（キャンペーン利用時）

Buffer P2 (FAPD2)･･･200 mM NaOH、1% SDS；室温保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
ミリQ	60 ml	自前	ｰ	？
NaOH	0.8 g	関東化学	37184−00	2円
SDS	1 g	富士フィルム和光純薬	191−07145	21円
ミリQ	100 mlにメスアップ	自前	ｰ	？

Buffer N3 (FAPD3)･･･4.2 M Gu-HCl、0.9 M potassium acetate、pH 4.8；室温保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
ミリQ	50 ml	自前	ｰ	？
酢酸カリウム	17.67 g	富士フィルム和光純薬	160−03175	101円
グアニジン塩酸塩	80.25 g	富士フィルム和光純薬	078−05003	1035円（キャンペーン利用時）
このままでは溶けないため、酢酸（cc 10 ml）でpH 4.8にする	ｰ	富士フィルム和光純薬	017−00251	16円
ミリQ	200 mlにメスアップ	自前	ｰ	？

Buffer PB (W1 buffer)･･･5 M Gu-HCl containing 30% isopropanol；室温保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
ミリQ	50 ml	自前	ｰ	？
グアニジン塩酸塩	95.53 g	富士フィルム和光純薬	078−05003	1232円（キャンペーン利用時）
このままでは溶けないため、ミリQ加える	140 mlにメスアップ	自前	−	？
溶けたらイソプロを加える	60 ml	関東化学	32435−00	114円

Buffer PE (Wash buffer)･･･10 mM Tris-HCl pH 7.5 containing 80% etanol；室温保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
ミリQ	80 ml	自前	ｰ	？
Tris	0.61 g	富士フィルム和光純薬	203−06277	ほぼゼロ
6 M HClでpH 7.5にする	cc 500 µl	関東化学	18078−70	ほぼゼロ
ミリQ	100 mlにメスアップ	自前	ｰ	？
エタノール	400 ml	関東化学	14033−00	1920円

1 M Tris-HCl pH 8.0；4℃保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
DIW	350 ml	自前	ｰ	？
Tris	60.55 g	富士フィルム和光純薬	203−06277	316円
濃HClでpH 8.0にする	ｰ	関東化学	18078−70	40円ぐらい
DIW	500 mlにメスアップ	自前	ｰ	？
オートクレーブ	ｰ	ｰ	−	ｰ

0.5 M EDTA pH 8.0；室温保存

試薬	加える量	メーカー	カタログ番号	コスト
DIW	70 ml	自前	ｰ	？
EDTA	18.61 g	関東化学	14097−00	246円
NaOH	2 gぐらい	関東化学	37184−00	5円ぐらい
5 M NaOHでpH 8.0にする	適量	自作	ｰ	？
DIW	100 mlにメスアップ	自前	ｰ	？
オートクレーブ	ｰ	ｰ	−	ｰ

プロトコル

　Favorgenやキアゲンなどメーカーのプロトコルに従って行うだけです。キットと同等の収量と品質で全く問題ありません。ちなみにElution bufferは普通の10 mM Tris-Cl, pH 8.5です。これも自作可能ですね。

コストに関する考察

　今回自作したbufferを300 prep分の量に換算すると、3150円ほどかかることが計算から判明しました（笑）。。。結構高いですね。。。一方、Favorgenのキットは17000円です。単品カラムを購入した場合300個で値引きを鑑みても、14000円弱と思います。ということは、単品カラム＋Buffer自作だと、17000円程度になりますねΣ(ﾟдﾟ) ｴｯ!? ということは、、、ミニプレップキットとコストが変わらないことが判明しました！！！意味ないですね！！！マンパワーを考えるとマイナスも甚だしです＼(^o^)／ｵﾜﾀ