SDS-PAGEに欠かせないCBB染色の時短により早く帰宅したい
目的
生物系のラボでは日々、SDS-PAGEからのCBB染色をしていると思います。リコンビナント蛋白質の発現確認、精製度のチェックなどなど幅広い用途でこれを行っています。前回の記事では、このCBB染色液を自作することによってコストダウンを謀りました。
kanenashi-kenkyu.hatenablog.com
これによってコストは安くなりましたが、実はCBB染色での最大の悩みは時間がかかることです。電気泳動→染色→脱色の過程はtime-consumingな過程であり、イライラがとまらないでいました。そこで今回は、CBB染色の時短によって早く帰宅して幸せになることを目的とし、時短法について紹介します。
通常プロトコルについて
まずはOld-fashioned recipeのCBB染色液を使う際の通常プロトコルを記します。
SDS-PAGE
↓ゲルをCBB染色に浸す
↓振盪（30〜120分程度）
↓CBB染色液を捨てる
↓DIWで2回ぐらいリンス
↓脱色液に浸し、キムワイプ等をいれる
↓振盪（180分ぐらい？）
↓脱色液交換
↓振盪（overnight？）
撮影
かったるくてやってられないですね（笑）そこで、これら染色と脱色の過程を短くしたいと思います。そのための武器は、電子レンジです。
電子レンジを使って時短する
次に、電子レンジを使って時短する方法です。
プロトコル
SDS-PAGE
↓ゲルをCBB染色（20 ml）に浸す
↓電子レンジ（600 Wで30〜35秒ぐらい；沸騰直前ぐらい）
↓振盪（5〜10分）
↓CBB染色液を捨てる
↓DIWで2回ぐらいリンス
↓脱色液に浸し、キムワイプ等をいれる
↓電子レンジ（600 Wで1〜2分ぐらい。脱色液の量に依存；沸騰直前ぐらい）
↓振盪（10分）
↓脱色液を捨てる
↓脱色液に浸し、キムワイプ等をいれる
↓電子レンジ（600 Wで1〜2分ぐらい。脱色液の量に依存；沸騰直前ぐらい）
↓振盪（10分）
撮影
結果
染色過程
- 電子レンジでチンした後に5または10分浸透しましたが、振盪時間は5分で十分でした。
脱色過程
- 電子レンジでチンした後に10分振盪するだけでバンドは確認可能になりました。
- この過程をもう1サイクル行うと、もう十分のSN比だと思います。
- もっとバックグラウンドを低減したい場合は、この後普通に一晩脱色液で振盪すれば良いと思います。
終わりに
このように、電気泳動終了後40分程度でCBB染色を終えることが出来ました。普通にやると4時間ぐらいかかりそうな気がするので、この時短は幸せなのではないでしょうか。
研究費もマンパワーもないけど、なんとか実験して論文を出していきたいですね。
